Оптималь концентрацияне ничек билгеләргә?
Индуктивлык кәтүге IPTG өчен (изопропил-бета-д-тиогалактозид), концентрация никадәр югары булса, яхшырак.Оптималь концентрация конкрет эксперимент шартларына һәм кирәкле индукция эффектына бәйле.
Гадәттә, IPTG концентрациясе 0,1-1 мм диапазонында кулланыла.Түбән концентрацияләр күзәнәк үсешенә тискәре йогынты ясарга һәм цитотоксиклылыкны киметергә мөмкин, максатлы протеиннарның чиктән тыш кысылуы аркасында.Higherгары концентрацияләр күзәнәкнең метаболик авырлыгын арттырырга мөмкин, бу күзәнәк үсешенә һәм экспресс эффективлыгына тәэсир итә.
Оптималь концентрацияне билгеләү ысулы - төрле концентрацияләрдә IPTG индукция сынаулары үткәреп, максатлы протеинның экспрессив дәрәҗәсен бәяләү булырга мөмкин.Кечкенә масштаблы культуралы тестлар IPTG концентрацияләре (мәсәлән, 0,1 мм, 0,5 мм, 1 мм һ.б.) ярдәмендә үткәрелергә мөмкин, һәм төрле концентрацияләрдә экспресс-эффект максатлы протеинның экспрессия дәрәҗәсен ачыклап бәяләнергә мөмкин (мәсәлән, Көнбатыш блот яки флуоресцентны ачыклау).Эксперименталь нәтиҗәләр буенча, иң яхшы экспресс эффекты булган концентрация оптималь концентрация итеп сайланды.
Моннан тыш, сез шулай ук тиешле эксперимент шартларында еш кулланыла торган IPTG концентрация диапазонын аңлау өчен тиешле әдәбиятка яки башка лабораторияләр тәҗрибәсенә мөрәҗәгать итә аласыз, аннары эксперимент ихтыяҗлары буенча оптимальләштерә аласыз.
Әйтергә кирәк, оптималь концентрация төрле экспресс системаларына, максатлы протеиннарга һәм эксперимент шартларына карап төрле булырга мөмкин, шуңа күрә оптимальләштерү яхшырак.
Пост вакыты: 28-2023 сентябрь