Дитиотрейтол (DTT) - гадәттә кулланыла торган киметүче агент, ул яңа яшел өстәмә дип тә атала.Бу ике меркаптан төркеме (-SH) булган кечкенә молекуляр органик кушылма.Аның кимү үзенчәлекләре һәм тотрыклылыгы аркасында, DTT биохимиядә һәм молекуляр биология экспериментларында киң кулланыла.
ДТТның төп роле - протеиннарда һәм башка биомолекулаларда диффид бәйләнешләрен киметү.Дезулфид бәйләнеше - протеин катлау һәм тотрыклылыкның мөһим өлеше, ләкин кайбер эксперименталь шартларда, мәсәлән, кими торган SDS-PAGE анализы, протеин рекомбинациясе һәм катлау кебек, киңлек структурасын ачу өчен, диффид бәйләнешен ике тиол төркеменә киметергә кирәк. протеин.DTT диффид бәйләнешләре белән реакция ясый ала, аларны меркаптан төркемнәренә киметә, шулай итеп протеинның киңлек структурасын ача һәм анализлау һәм эшкәртү җиңел итә.
DTT шулай ук ферментларның активлыгын һәм тотрыклылыгын саклау өчен кулланылырга мөмкин.Кайбер фермент-катализатор реакцияләрдә ферментның активлыгы оксидан белән кимергә мөмкин.DTT зарарсыз матдәләргә киметү өчен оксидантлар белән реакция ясый ала, шуның белән ферментның активлыгын һәм тотрыклылыгын саклый.
Traditional-mercaptoethanol (β-ME) кебек традицион киметүче агентлар белән чагыштырганда, DTT куркынычсыз һәм тотрыклырак киметүче агент булып санала.Ул су эремәсендә тотрыклы гына түгел, ә югары температурада һәм кислота базасы шартларында киметү үзенчәлекләрен саклый.
DTT куллану чагыштырмача гади.Гомумән, DTT тиешле буферда эретелә, аннары эксперимент системасына өстәлә.DTT оптималь концентрациясе конкрет эксперимент буенча билгеле булырга тиеш, һәм гадәттә 0,1-1М диапазонында кулланыла.Түбән концентрацияләр күзәнәк үсешенә тискәре йогынты ясарга һәм цитотоксиклылыкны киметергә мөмкин, максатлы протеиннарның чиктән тыш кысылуы аркасында.Higherгары концентрацияләр күзәнәкнең метаболик авырлыгын арттырырга мөмкин, бу күзәнәк үсешенә һәм экспресс эффективлыгына тәэсир итә.
Оптималь концентрацияне билгеләү ысулы - төрле концентрацияләрдә IPTG индукция сынаулары үткәреп, максатлы протеинның экспрессив дәрәҗәсен бәяләү булырга мөмкин.Кечкенә масштаблы культуралы тестлар IPTG концентрацияләре (мәсәлән, 0,1 мм, 0,5 мм, 1 мм һ.б.) ярдәмендә үткәрелергә мөмкин, һәм төрле концентрацияләрдә экспресс-эффект максатлы протеинның экспрессия дәрәҗәсен ачыклап бәяләнергә мөмкин (мәсәлән, Көнбатыш блот яки флуоресцентны ачыклау).Эксперименталь нәтиҗәләр буенча, иң яхшы экспресс эффекты булган концентрация оптималь концентрация итеп сайланды.
Моннан тыш, сез шулай ук тиешле эксперимент шартларында еш кулланыла торган IPTG концентрация диапазонын аңлау өчен тиешле әдәбиятка яки башка лабораторияләр тәҗрибәсенә мөрәҗәгать итә аласыз, аннары эксперимент ихтыяҗлары буенча оптимальләштерә аласыз.
Әйтергә кирәк, оптималь концентрация төрле экспресс системаларына, максатлы протеиннарга һәм эксперимент шартларына карап төрле булырга мөмкин, шуңа күрә оптимальләштерү яхшырак.
Йомгаклап әйткәндә, DTT - гадәттә кулланыла торган киметүче агент, ул протеиннардагы һәм башка биомолекулалардагы диффид бәйләнешләрен киметү өчен, ферментларның активлыгын һәм тотрыклылыгын саклау өчен кулланыла ала.Ул биохимиядә һәм молекуляр биология экспериментларында киң кулланылган.
Пост вакыты: 28-2023 сентябрь