Дитиотреитол (ДТТ) - еш кулланыла торган киметү матдәсе, ул шулай ук яңа яшел өстәмә буларак та билгеле. Ул ике меркаптан төркеме (-SH) булган кечкенә молекуляр органик кушылма. Киметү үзлекләре һәм тотрыклылыгы аркасында ДТТ биохимия һәм молекуляр биология тәҗрибәләрендә киң кулланыла.
ДТТның төп роле - аксымнарда һәм башка биомолекулаларда дисульфид бәйләнешләрен киметү. Дисульфид бәйләнеше аксымнарның бөкләнүе һәм тотрыклылыгының мөһим өлеше, ләкин кайбер эксперименталь шартларда, мәсәлән, редукцияләнүче SDS-PAGE анализы, аксымнарның рекомбинациясе һәм бөкләнүе вакытында, аксымның киңлек структурасын ачу өчен дисульфид бәйләнешен ике тиол төркеменә кадәр киметү кирәк. ДТТ дисульфид бәйләнешләре белән реакциягә кереп, аларны меркаптан төркемнәренә кадәр киметә ала, шуның белән аксымның киңлек структурасын ача һәм аны анализлауны һәм манипуляцияләүне җиңеләйтә.
ДТТ шулай ук фермент активлыгын һәм тотрыклылыгын саклау өчен дә кулланылырга мөмкин. Кайбер фермент катализланган реакцияләрдә фермент активлыгы оксидант тарафыннан киметелергә мөмкин. ДТТ оксидантлар белән реакциягә кереп, аларны зарарсыз матдәләргә әйләндерә ала, шуның белән фермент активлыгын һәм тотрыклылыгын саклый.
β-меркаптоэтанол (β-ME) кебек традицион киметү агентлары белән чагыштырганда, ДТТ куркынычсызрак һәм тотрыклырак киметү агенты дип санала. Ул су эремәсендә тотрыклы гына түгел, ә югары температура һәм кислота-нигез шартларында да үзенең киметү үзлекләрен саклый.
ДТТ куллану чагыштырмача гади. Гомумән алганда, ДТТ тиешле буферда эретелә һәм аннары эксперименталь системага өстәлә. ДТТның оптималь концентрациясен конкрет экспериментка карап билгеләргә кирәк, һәм ул гадәттә 0,1-1 мМ диапазонында кулланыла. Түбәнрәк концентрацияләр күзәнәк үсешенә тискәре йогынтыны киметергә һәм максатлы аксымнарның артык экспрессиясе аркасында цитотоксиклыкны киметергә мөмкин. Югарырак концентрацияләр күзәнәк метаболик йөкләнешне арттырырга мөмкин, бу күзәнәк үсешенә һәм экспрессия нәтиҗәлелегенә тәэсир итә.
Оптималь концентрацияне билгеләү ысулы - төрле концентрацияләрдә IPTG индукция тестларын үткәрү юлы белән максатлы аксымның экспрессия дәрәҗәсен бәяләү. Кечкенә масштаблы культура тестларын IPTG концентрацияләре диапазоны ярдәмендә (мәсәлән, 0,1 мМ, 0,5 мМ, 1 мМ һ.б.) үткәрергә мөмкин, ә төрле концентрацияләрдә экспрессия эффектын максатлы аксымның экспрессия дәрәҗәсен ачыклау юлы белән бәяләргә мөмкин (мәсәлән, Вестерн-блот яки флуоресценция детекторы). Эксперименталь нәтиҗәләргә нигезләнеп, иң яхшы экспрессия эффектына ия концентрация оптималь концентрация буларак сайланган.
Моннан тыш, охшаш эксперименталь шартларда еш кулланыла торган IPTG концентрация диапазонын аңлау өчен, сез шулай ук тиешле әдәбиятка яки башка лабораторияләр тәҗрибәсенә мөрәҗәгать итә аласыз, аннары эксперименталь ихтыяҗларга туры китереп оптимальләштерә һәм көйли аласыз.
Шунысын да билгеләп үтәргә кирәк, оптималь концентрация төрле экспрессия системаларына, максатчан аксымнарга һәм эксперименталь шартларга карап үзгәрергә мөмкин, шуңа күрә һәр очракны аерым карап оптимальләштерү яхшырак.
Кыскасы, ДТТ - аксымнарда һәм башка биомолекулаларда дисульфид бәйләнешләрен киметү һәм фермент активлыгын һәм тотрыклылыгын саклау өчен кулланыла торган еш кулланыла торган киметү агенты. Ул биохимия һәм молекуляр биология экспериментларында киң кулланыла.
Бастырып чыгару вакыты: 2023 елның 28 сентябре