Безнең тирәбездә күп кенә данланмаган геройлар бар, алар гади булып күренсәләр дә, чынлыкта алар безгә тын гына зур өлеш кертә. Протеиназа К - молекуляр диагностика тармагында "данланмаган герой", гәрчә тармактагы "зур һәм көчле" белән чагыштырганда, протеиназа К шулкадәр тыйнак ки, без аның әһәмиятен күптән онытып җибәрдек. Яңа таҗ эпидемиясе башлану белән, протеиназа К га ихтыяҗ кискен артты, һәм илдә дә, чит илләрдә дә тәкъдим кулланудан күпкә артта калды, һәм барысы да кинәт кенә протеиназа К ның шулкадәр мөһим икәнен аңлады.
Протеиназа К ни өчен кулланыла?
Протеиназа К - протеолитик фермент активлыгына ия серин протеазасы һәм ул төрле мохитләрдә (рН (4-12,5), югары тозлы буфер, 70°C югары температура һ.б.) активлыгын саклый ала. Моннан тыш, протеиназа К активлыгы SDS, мочевина, ЭДТА, гуанидин гидрохлориды, гуанидин изотиоцианаты һ.б. белән тоткарланмый, һәм билгеле бер күләмдәге югыч матдә дә протеиназа К активлыгын арттыра ала. Медицинада дәвалауда (вирус һәм микроб дезинфекциясе), азык-төлектә (ит йомшарту), тиредә (чәч йомшарту), шәраб ясауда (спирт белән чистарту), аминокислота әзерләүдә (каурыйларны бозу), нуклеин кислотасын экстракцияләүдә, урынында гибридизацияләүдә һ.б. протеиназа К кулланылышлары бар. Иң еш кулланыла торган кулланылыш - нуклеин кислотасын экстракцияләү.
Протеиназа К үрнәктәге барлык төр аксымнарны, шул исәптән нуклеин кислоталары белән нык бәйләнгән гистоннарны да ферментлаштыра ала, шуңа күрә нуклеин кислоталары үрнәктән чыгарылып, экстрактка чыгарыла ала, бу экстракция һәм чистартуның киләсе этабын җиңеләйтә. Вирус нуклеин кислотасын ачыклауда протеиназа К вирус үрнәкләре эремәсендә мөһим компонентларның берсе булып тора. Протеиназа К вирусның каплау аксымын шартлатып, активлаштыра ала, бу транспорт һәм ачыклау этабында куркынычсызрак; өстәвенә, протеиназа К шулай ук РНКны таркатырга мөмкин, вирус РНКсының таркалуын булдырмый һәм нуклеин кислотасын ачыклауны җиңеләйтә.
Протеиназа К-ның бер төнлек данлыгы
Фәнни тикшеренүләр өлкәсендәме, яисә IVD өлкәсендәме, нуклеин кислотасын экстракцияләү иң төп эксперимент булып тора, шуңа күрә протеиназа К һәрвакыт бик мөһим булган. Ләкин элек протеиназа К аның роленә караганда күпкә аз билгеле иде. Моның зур өлеше протеиназа К-ның тәкъдим һәм сорау мөнәсәбәте бик тотрыклы булу белән бәйле иде. Протеиназа К белән тәэмин итү проблема тудырыр дип аз кеше уйлар иде.
Яңа таҗ эпидемиясе башлану белән, нуклеин кислотасын тикшерүгә ихтыяҗ кискен артты. 2020 елның июнь ахырына Кытайда якынча 90 миллион яңа таҗ сынауы үткәрелде, һәм бу сан дөнья күләмендә тагын да куркынычрак. Нуклеин кислотасын экстракцияләү экспериментларында протеиназа Кның эш концентрациясе якынча 50-200 мкг/мл тәшкил итә. Гадәттә, нуклеин кислотасы үрнәген алу өчен якынча 100 мкг протеиназа К кирәк. Чынлыкта, нуклеин кислотасын экстракцияләү нәтиҗәлелеген арттыру өчен, еш кына протеиназа К күбрәк күләмдә кулланыла. Яңа коронавирусның нуклеин кислотасын ачыклау протеиназа Кга зур күләмдә ихтыяҗ китерде. Протеиназа Кның башлангыч тәкъдим һәм сорау балансы тиз арада бозылды, һәм протеиназа К эпидемияне профилактикалауның мөһим материалына әйләнде.
Протеиназа К җитештерүдәге кыенлыклар
Эпидемия үсеше белән, кешеләр протеиназа К-ның мөһим кыйммәтен бәяләсәләр дә, протеиназа К-ның артык түбән сыйфаты аркасында, протеиназа К җитештерүдә бик аз компания катнашуы оят. Кешеләр протеиназа К җитештерүен булдырырга теләгәндә. Җитештерү процессы барышында протеиназа К-ның бик үзенчәлекле аксым булуы ачыкланды. Протеиназа К җитештерү куәтен кыска вакыт эчендә киңәйтү бик авыр.
Протеиназа К-ны зур күләмдә җитештерү түбәндәге кыенлыклар белән очраша
1. Түбән экспрессия
Протеиназа К күпчелек аксымнарны специфик булмаган рәвештә таркатырга һәм экспрессия хуҗасы күзәнәгенә җитди токсиклык китерергә мөмкин. Шуңа күрә протеиназа К экспрессия дәрәҗәсе, гадәттә, бик түбән. Протеиназа К югары экспрессияләнә торган экспрессия системаларын һәм штаммнарын тикшерү, гадәттә, озаграк цикл таләп итә.
2. Пигментлар һәм нуклеин кислоталары калдыклары
Зур күләмле ферментация күп күләмдә пигмент һәм хуҗа нуклеин кислотасы калдыкларын кертә. Бу пычракларны гади чистарту процессы белән бетерү авыр, ә катлаулы чистарту чыгымнарны арттыра һәм торгызу тизлеген киметә.
3. Тотрыксызлык
Протеиназа К җитәрлек дәрәҗәдә тотрыклы түгел, ул үзен ферментлаштыра ала, һәм аны саклагыч агентсыз 37°C температурада озак вакыт тотрыклы саклау авыр.
4. Чөкмәгә җиңел эләгә
Протеиназа Кның туңдырылган порошогын әзерләгәндә, туңдырылган порошоктагы протеиназа Кның каты матдә күләме зур булуын тәэмин итү өчен, югары концентрациядә туңдырылган саклагыч агент өстәргә кирәк, ләкин протеиназа К концентрациясе 20 мг/мл һәм аннан да югарырак булганда, агрегация җиңел була. Чөкмә барлыкка килә, бу каты матдә күләме югары булган протеиназа Кны туңдырылган киптерүдә зур кыенлыклар тудыра.
5. Зур инвестицияләр
Протеиназа К көчле протеаза активлыгына ия һәм лабораториядә башка протеазаларны гидролизлый ала. Шуңа күрә протеиназа К тикшеренүләр һәм эшләнмәләр һәм җитештерү өчен махсуслаштырылган җитештерү зоналары, җиһазлар һәм персонал таләп итә.
XD BIOCHEM протеиназа К эремәсе
XD BIOCHEM компаниясенең өлгергән аксым экспрессиясе һәм чистарту платформасы бар, ул рекомбинант аксымнарны экспрессияләү һәм чистарту, җитештерү процессларын оптимальләштерү өлкәсендә бай тәҗрибәгә ия. Фәнни-тикшеренү һәм эшләү төркемен тиз формалаштыру нәтиҗәсендә, протеиназа К җитештерү процессы җиңелде. Туңдырылган килеш киптерелгән порошокның айлык җитештерү күләме 30 кг нан артык. Продукт тотрыклы эш күрсәткечләренә, югары ферментларга специфик активлыкка ия, һәм хуҗа цитохромы һәм нуклеин кислотасы калдыклары юк. XD BIOCHEM белән элемтәгә керергә рәхим итегез. Сынау пакетын алыгыз (Электрон почта:sales@xdbiochem.comТел.: +86 513 81163739).
XD BIOCHEM техник чишелешләре түбәндәгеләрне үз эченә ала
Күп күчермәле плазмид интеграциясен кулланып, 8 г/л экспрессия дәрәҗәсе булган югары экспрессияле штаммнар сайлана, бу протеиназа К түбән экспрессия дәрәҗәсе проблемасын хәл итә.
Күп баскычлы чистарту процессын булдыру аша, стандарт кыйммәттән түбәнрәк булган протеиназа К-ның хуҗа цитохромы һәм нуклеин кислотасы калдыклары уңышлы бетерелде.
Саклагыч буфер формулаларын югары җитештерүчәнлекле скрининг аша, протеиназа К ны 37°C температурада тотрыклы саклый ала торган буфер сайланган.
Скрининг буферлары протеиназа К югары концентрацияләрдә агрегацияләнү һәм чөкмәгә утыру җиңел булу проблемасын хәл итә һәм протеиназа Кның югары каты күләмле туңдыру-киптерү өчен нигез сала.
XD BIOCHEM протеиназа К үрнәге
XD BIOCHEM протеиназа К тотрыклылык тесты: бүлмә температурасында 80 көннән соң активлыкта сизелерлек үзгәрешләр булмаячак
XD BIOCHEM протеиназа К тотрыклылык тесты: бүлмә температурасында 80 көннән соң активлыкта сизелерлек үзгәрешләр булмаячак.
XD BIOCHEM протеиназа К һәм көндәш продуктларның нуклеин кислотасын экстракцияләү эффектын чагыштыру. Нуклеин кислотасын экстракцияләү процессында XD BIOCHEM һәм көндәш протеиназа К кулланыла. XD BIOCHEM протеиназа К экстракцияләү эффективлыгы югарырак, ә максатлы генның Ct кыйммәте түбәнрәк.
Бастырып чыгару вакыты: 2021 елның 31 декабре